Obtención de plantas compuestas de olivo mediante transformación con Agrobacterium rhizogenes

Abstract

La transformación con Agrobacterium rhizogenes ha sido utilizada como herramienta para estudios de genómica funcional en raíces (Collier et al. 2005 Plant Journal 43:449-457; Baranski et al. 2006 Plant Cell Reports 25:190-197). La obtención de plantas compuestas de olivo (sistema radicular transgénico y parte aérea no transgénica), mediante esta técnica, sería de gran ayuda para estudiar la interacción de esta especie con los patógenos de suelo Verticillium dahliae y Rosellinia necatrix. En este trabajo, se presentan las primeras aproximaciones para la transformación de brotes micropropagados de olivo mediante A. rhizogenes. Se han utilizado 2 genotipos procedentes de semilla del cv. Picual, uno con baja capacidad de enraizamiento, P1, y otro, con alta capacidad, P138, y dos cepas de A. rhizogenes: A4, que contiene el plásmido silvestre Ri, y K599, con el plásmido binario pKGWFS7.0-35SP, que incluye el gen marcador gfp. En el caso del genotipo P1, en la fase de co-cultivo con la bacteria, se añadieron al medio 3 mg/l AIB, para facilitar la formación de raíces. En el genotipo P138, se obtuvo un 100% de enraizamiento tanto en el tratamiento control como en el de brotes infectados con la cepa A4; sin embargo, aquéllos inoculados con la cepa K599 sólo alcanzaron un 70% de enraizamiento. Asimismo, se observó que el 61% de las raíces obtenidas tras la infección con K599 mostraron fluorescencia verde bajo el microscopio confocal. En el genotipo P1, el 60% de las plantas control formaron raíces, frente al 10% de plantas infectadas con A4 y ninguna con la cepa K599. La naturaleza transgénica de las raíces obtenidas tras la infección con A4, en ambos genotipos, se evaluará mediante amplificación por PCR del gen RolB.