Determinación de parámetros cinéticos de una nueva glutamina sintetasa en Pinus pinaster

Abstract

En las plantas, la glutamina sintetasa (GS, EC 6.3.1.2) es una enzima fundamental en el metabolismo del nitrógeno, siendo la responsable de la incorporación del nitrógeno inorgánico en las moléculas, catalizando la condensación de amonio y glutamato para producir glutamina con gasto de ATP1. Dentro de las gimnospermas, las coníferas conforman el grupo más importante. Constituido por plantas leñosas, es un grupo de gran interés comercial y ecológico2. En coníferas, con las técnicas moleculares clásicas únicamente se había detectado la expresión de dos isoformas citosólicas de esta enzima: GS1a y GS1b. La GS2 (isoforma plastidial), a pesar de encontrarse en angiospermas y en la gimnosperma Ginkgo biloba, no se ha detectado funcionalmente en coníferas2. En la base de datos ProCoGen que incluye el transcriptoma de Pinus pinaster, y que ha sido desarrollada por nuestro grupo3, se ha descubierto un gen que codifica para una nueva isoforma citosólica que denominamos, PpGS1c. La proteína ha sido expresada de forma recombinante en Escherichia coli con His-Tag en su extremo N-terminal que se ha usado para su purificación. Las propiedades físico-químicas y los parámetros cinéticos de GS1c han sido determinados a partir de la proteína recombinante purificada.