Estudio in vitro de la actividad tipo citoquina de ISG15 de lubina frente a infecciones por Betanodavirus - Moreno-García, Patricia; Leiva-Rebollo, Rocío; García-Rosado, Esther; Béjar-Alvarado, Julia; Alonso-Sánchez, María del Carmen (My University, 2022)
El sistema interferón tipo I (IFN-I) establece un estado antiviral mediante la transcripción de los llamados genes estimulados por IFN (ISG). Destaca el gen isg15, cuya proteína es la única descrita que presenta actividad citoquina La necrosis nerviosa viral es una enfermedad causada por el virus de la necrosis nerviosa (NNV, género Betanodavirus). Este virus se clasifica en 4 especies, siendo RGNNV la única asociada a elevadas mortalidades en lubina. El presente trabajo estudia la capacidad de la proteína ISG15 extracelular de lubina (Dl_ISG15) de establecer un estado antiviral en la línea celular E-11 frente a la infección por RGNNV. Se ha evaluado la interferencia de Dl_ISG15 sobre la propagación de un aislado RGNNV de lubina mediante ensayos de supervivencia celular (MTT) y cuantificación de genoma viral (qPCR) y de partículas infectivas (TCDI50). Además, se ha analizado la actividad inmunomoduladora de Dl_ISG15 sobre células E-11, cuantificando la transcripción de mx, tlr3, hsp70 y tnf-α. La proteína Dl_ISG15 extracelular protege frente a RGNNV. Así, el porcentaje de células E-11 expuestas a Dl_ISG15 que sobrevivió a la infección fue 92,6%, significativamente superior a la supervivencia de las células control (61%), resultado derivado del menor nivel de multiplicación vírica observado en las células tratadas. La inmunoprecipitación de Dl_ISG15 disminuye significativamente el porcentaje de supervivencia celular, lo que demuestra la participación directa de esta proteína en la protección observada. Además, Dl_ISG15 modula la transcripción de genes en las células diana, destacando el gen mx, fuertemente inducido a las 48 h en células expuestas a esta proteína. Finalmente, experimentos de supervivencia celular realizados con Dl_ISG15 recombinante (rDl_ISG15) han corroborado los resultados anteriormente expuestos. Así, células E-11 tratadas con rDl_ISG15 a 1,5 x 10-1 mg/mL quedan protegidas frente a la infección por el aislado RGNNV (93,1% de supervivencia).
Keywords: Lubinas - Enfermedades por virus - Congresos; ISG15; Dicentrarchus labrax; Citoquina; Betanodavirus; Lubina