Degradación del ADN por exposición a campos magnéticos pulsados y agentes genotóxicos

Abstract

Debido a la preocupación por los daños que ocasiona las radiaciones a lo largo de los años se han desarrollado un gran número de dosímetros para cuantificar dichas radiaciones. Se han diseñado físicos y biológicos pero ninguno llega a resultar completo en sus resultados. Los agentes físicos UVC y CMP se han analizado y descrito sus efectos en muchos artículos. Pero hasta la fecha, en el caso del CMP, no se ha encontrado consenso en los resultados; puesto que existen ensayos en los que a una misma dosis de CM en unos casos ha dado efectos y en otros no. Pero de lo que sí existe un consenso es que el CMP y UVC provocan daño sobre la molécula de ADN, aunque no se ha encontrado una relación lineal entre los daños y la dosis. Además, se han estudiados en esta tesis otros dos agentes, MMS y Bleomicina; ambos se han demostrado capaces de provocar rotura de la molécula de ADN. En el trabajo que aquí se presenta se pretende analizar daños a nivel de la molécula de ADN de diferentes agentes. Para evitar los mecanismos de reparación celular se analizaron el efecto de los agentes sobre la molécula de ADN directamente. Se han escogido diferentes modelos de ADN (genómico de S. Cerevisae, marcador HL-I y fago T7), para poder encontrar el modelo que presenta una mejor sensibilidad. Y se han analizado agentes físicos (UVC y CMP) y químicos (MMS y Bleomicina); por separado y en combinación. Para la visualización de los resultados se ha empleado electroforesis en gel de agarosa; así como una cuantificación del gel a través del programa de análisis de geles GelAnalyzer. Los resultados de este trabajo muestra que existe un efecto del CMP (25 Hz, 1,5 mT), pero sólo se detecta sobre ADN genómico, no sobre marcador HL-I y los tiempos de exposición necesarios son largos. Cuando se combina CMP con MMS o Bleomicina, se produce un aumento del daño y son necesarios un tiempo menor y dosis más bajas del agente químico para provocar daño sobre la molécula de ADN. El MMS provoca daño sobre la molécula de ADN marcador HL-I, genómico y fago T7, pero se observó un menor daño sobre el marcador HL-I en las dosis y tiempos analizados. Estadísticamente se analizó su efecto sobre ADN genómico y fago T7 siendo significativo la región de ADN dañado a 48 horas y ADN total a 24 horas en el caso de ADN genómico; y en las regiones dañado, enrollado y lineal del fago T7 tras 48 horas de exposición. Por lo que el resultado de los ensayos debe ser combinación de observación de gel, gráfica y estadística. Teniendo en cuenta estas tres cosas se observó que existe efecto de MMS sobre la molécula de ADN. Bleomicina también mostró efecto sobre ADN genómico cuando las dosis aplicadas fueron elevadas y el tiempo de exposición fue igual o superior a 24 horas. El efecto combinado de los agentes UVC y MMS se analizó sobre dos modelos de ADN: genómico y fago T7. Como resultado las imágenes del gel indican que la dosis con más efecto es 51,75 J/m2 en el caso de ADN genómico y ADN fago T7 para los tiempos 24 y 48 horas. Además, la dosis más alta 103,5 J/m2 parece mostrar menos degradación. Pero el análisis estadístico la dosis de UVC que muestra una mejor relación fue 75,9 J/m2 en el caso de ADN genómico y la dosis 103,5 J/m2 en fago T7. Teniendo en cuenta que la medición del gel es poco sensible y hay que combinar con lo observado en el gel; se puede concluir que las dosis más altas de 75 J/m2 UVC provocan menor daño que las dosis más bajas. Se concluye que la exposición durante un largo período de tiempo a campo magnético pulsado induce un incremento en la degradación espontánea del ADN genómico. Su combinación con MMS y bleomicina potencia el efecto de estos agentes genotóxicos. La radiación UVC en combinación con MMS induce un incremento del efecto de degradación del ADN provocado por el MMS.